Кислотная экстракция заключается в использовании кислотного раствора определенной концентрации для извлечения коллагена при определенных условиях, в основном с использованием кислых условий с низкой концентрацией ионов для разрушения межмолекулярных солевых связей и оснований Шиффа, а также для набухания и растворения волокон. Коллаген, экстрагированный кислотным методом, обычно становится кислоторастворимым коллагеном. Метод кислотного растворения может растворять молекулы коллагена без образования поперечных связей, а также может растворять волокна коллагена, содержащие альдиминовые сшивающие связи, и затем высвобождать их в растворитель. Кислотный метод является относительно распространенным и эффективным методом извлечения коллагена. Коллаген, полученный низкотемпературным кислотным методом, в наибольшей степени сохраняет свою структуру тройной спирали и пригоден для приготовления медицинских биологических материалов и сырья. Обычной практикой является добавление соответствующей концентрации раствора кислоты к предварительно обработанной костной муке в соответствии с определенным соотношением материала и жидкости, перемешивание и экстракция при температуре 0-25 в течение определенного периода времени. При использовании кислотного метода экстракции коллагена следует учитывать, что температура экстракции не должна быть слишком высокой, во избежание разрушения биологической активности коллагена. После отбора проб и предварительной обработки гомогенат экстрагировали кислотой при низкой температуре и центрифугировали для получения кислоторастворимого коллагена (ASC). Кислоты, используемые в качестве растворителей, в основном включают соляную кислоту, фосфорную кислоту, муравьиную кислоту, уксусную кислоту, яблочную кислоту, лимонную кислоту и т. д., но большинство исследований сосредоточено на экстракции уксусной кислотой. Например, Мария Садовска и др. использовали 0.5mol/L лимонной кислоты для экстракции белка коллагена при комнатной температуре, скорость его экстракции немного ниже, чем при экстракции уксусной кислотой. Лимонная кислота широко используется для экстракции коллагена в пищевой промышленности, поскольку она не дает цвета и запаха.
Во время обработки кислотой реакция является сильной, гидролиз завершается, и в основном образуется смесь аминокислот. При использовании кислотной экстракции в зависимости от концентрации кислоты, температуры гидролиза, времени гидролиза и других условий можно получить гидролизат коллагена с неравномерной молекулярной массой. Однако триптофан разрушится, серин и тирозин также частично разрушятся, а оборудование подвергнется серьезной коррозии при полном гидролизе умеренной концентрации кислоты. Следовательно, кислотность, температура, время и другие влияющие факторы должны точно контролироваться для биомедицинского растворения коллагена кислотным методом. Из-за различных недостатков кислотный метод редко используется отдельно и обычно сочетается с ферментативным методом. Например, при использовании свиной кожи в качестве сырья коллаген извлекается при синергии лимонной кислоты (рН 8,6) и пепсина. Добавьте 0.05 моль/л раствора лимонной кислоты (pH 2.5-3), содержащего пепсин, к обработанной коже свиньи на некоторое время, а затем высолите с помощью NaCl, конечная скорость экстракции составляет 12,35%, а экстракт сохраняет нетронутыми три нити спиральной структуры коллагена I типа. Другие использовали грудной хрящ цыпленка в качестве сырья, несколько раз переваривали пепсином в условиях 0,5 моль/л уксусной кислоты, центрифугировали при 4 градусах и 20000 об/мин в течение 20 минут и, наконец, применяли DEAE-Sephadex A-50 для ионного обмена. хроматографией, а затем диализом, а затем высаливанием NaCl, и, наконец, был получен очищенный коллаген типа II.
